Contaminarea ADN în vaccinul Pfizer COVID a depășit de 500 de ori nivelul admisibil, potrivit unui studiu

Un nou studiu recenzat de colegi ridică îngrijorări cu privire la metodele de testare inadecvate pentru măsurarea impurităților ADN din vaccinurile cu ARNm COVID-19. Expertul în genomică Kevin McKernan a criticat metodele studiului, dar a susținut că contaminarea este în continuare peste limitele admise și că reglementările actuale sunt „total nepotrivite pentru scop”

Un nou studiu recenzat de colegi ridică îngrijorări cu privire la metodele utilizate pentru a testa potențialele impurități de ADN în vaccinul Comirnaty COVID-19 mRNA produs de Pfizer și BioNTech.

În studiul publicat luna aceasta în Methods and Protocols, cercetătorii germani Brigitte König și Jürgen O. Kirchner au pus la îndoială fiabilitatea tehnicii PCR cantitative (qPCR) pe care Pfizer-BioNTech a folosit-o pentru a măsura contaminarea cu ADN în substanța activă a vaccinului.

Cercetătorii au experimentat cu dizolvarea nanoparticulelor lipidice Comirnaty. Ei au descoperit niveluri de impuritate a ADN-ului de 360 până la 534 de ori mai mari decât limita de 10 ng (nanograme) pe doză stabilită de autoritățile de reglementare la nivel mondial.

Cercetătorii au propus că metodele de spectroscopie de fluorescență ar putea cuantifica în mod mai fiabil nivelurile totale de contaminare cu ADN prezente în produsul final, gata de utilizare, al vaccinului.

Kevin McKernan, director științific și fondator al Medicinal Genomics, a declarat pentru The Defender că, deși autorii au ridicat câteva puncte cruciale în ceea ce privește contaminarea cu ADN în vaccinurile cu ARNm COVID-19, coloranții fluorometrici pot fi nesiguri, ceea ce duce la citiri exagerate.

„O subdetecție masivă a impurităților de ADN„

Producătorii precum Pfizer-BioNTech utilizează teste de contaminare cu ADN care se bazează pe o metodă qPCR aplicată substanței active a vaccinului înainte de a fi combinată cu nanoparticule lipidice.

König și Kirchner au subliniat că testul qPCR caută doar un mic segment de 69 de perechi de baze din șablonul ADN original de 7.824 de perechi de baze utilizat pentru a produce vaccinul cu ARNm.

Acest lucru înseamnă că Pfizer verifică mai puțin de 1% din șablonul original. Restul de 99% rămâne neanalizat, ceea ce duce la „o subdetecție masivă a impurităților ADN”, au declarat aceștia.

Cercetătorii au susținut, de asemenea, că acest mic segment ar putea fi distrus la rate diferite față de restul fragmentelor șablonului de ADN în timpul procesului de digestie enzimatică, ceea ce ar putea confunda și mai mult măsurătorile precise.

Un alt factor care complică situația este faptul că secvența țintă qPCR se suprapune cu o secțiune de ADN numită promotor T7, utilizată pentru a produce ARNm. Mașinăria celulară sau produsele secundare s-ar putea lega de această regiune promotoare, împiedicând-o să fie detectată de testul qPCR.

David Speicher, Ph.D., coautor, împreună cu McKernan și alții, al unui studiu preprint privind fragmentele de ADN din vaccinurile COVID-19 de la Moderna și Pfizer, și-a exprimat preocupări similare.

PCR poate cuantifica doar o anumită secvență de ADN/ARN vizată de primerii utilizați, a declarat el pentru The Defender. În cazul în care există rupturi sau mutații în acea secvență țintă, „ADN-ul nu se va amplifica și încărcăturile vor fi sub-raportate”

„Există, de asemenea, o presupunere că ADN-ul din vaccin provine doar din plasmidă și nu din bacterii sau din orice altă sursă”, a spus Speicher.

McKernan a subliniat o altă problemă: Autoritățile de reglementare permit Pfizer să folosească qPCR pentru a măsura ADN-ul și fluorometria pentru a măsura ARN-ul.

„Reglementările de la EMA [Agenția Europeană pentru Medicamente] sunt o măsurare ratiometrică a ARN:ADN”, a spus el. „Rapoartele nu ar trebui să fie măsurate cu inci pentru ARN și metri pentru ADN”

El a spus că Pfizer ar trebui să măsoare atât ARN-ul, cât și ADN-ul folosind fluorometria sau qPCR. „Atunci când le permit să amestece și să potrivească astfel de instrumente, permit o înșelăciune vădită.”

McKernan a împărtășit, de asemenea, o parte din cererea de brevet a Moderna, care recunoaște că qPCR este inadecvată pentru măsurarea fragmentelor mici de ADN.

‘Nu mai dezbatem dacă injecțiile sunt contaminate’

Pentru a evita capcanele qPCR, care vizează doar o fracțiune minusculă din ADN-ul contaminant, König și Kirchner au propus utilizarea tehnicilor de spectroscopie de fluorescență, cum ar fi Qubit, pentru a cuantifica nivelurile totale de ADN în produsul final de vaccinare.

Aceste metode utilizează coloranți fluorescenți care se leagă în mod specific de acizi nucleici precum ADN și ARN.

Experimentele lor folosind tehnica de fluorescență cu Comirnaty au constatat o contaminare cu ADN semnificativ mai mare decât limita de 10 ng/doză după descompunerea nanoparticulelor.

Figura 2. Cuantificarea ADN-ului total în loturile de Comirnaty folosind fluorometria Qubit fără și cu adăugarea de Triton-X-100 ca detergent pentru dezintegrarea nanoparticulelor lipidice conținute în formula de vaccin. Credit: Brigitte König și Jürgen O. Kirchner.

McKernan, care a scris despre limitările fluorometriei pe Substack-ul său, a îndemnat la prudență atunci când se iau în considerare rezultatele lui König și Kirchner.

„Coloranții fluorometrici pot avea o legătură încrucișată între ARN și ADN, astfel încât cantități mari de ARN prezente în vaccin vor declanșa colorantul specific ADN-ului pentru a oferi un anumit semnal de la ARN”, a declarat el pentru The Defender. „Acest lucru duce la citiri umflate ale ADN-ului în lucrarea lui König”

Pentru a aborda această preocupare, McKernan a spus că cercetătorii ar trebui să efectueze un control al RNazei. RNase este o enzimă care șterge ARN, astfel încât nu există interferențe de la ARN atunci când se măsoară ADN-ul.

Fără acest control, König și Kirchner „au lăsat o suprafață de atac ușoară pentru criticii lor”, a spus el.

În cercetarea în curs de pregătire pentru publicare, McKernan a declarat că mai multe laboratoare care au efectuat experimente cu RNază au observat o reducere de 10 ori a semnalului ADN observat atunci când se utilizează fluorometria.

„Acest lucru lasă totuși contaminarea ADN-ului mult peste limita FDA [Administrația americană pentru alimente și medicamente]”, a spus McKernan. El a subliniat că „critica sa de doi bani” la adresa studiului nu ar trebui să diminueze sau să deraieze apelul la reevaluarea protocoalelor de testare a contaminării cu ADN pentru vaccinurile cu ARNm.

„Nu mai dezbatem dacă vaccinurile sunt contaminate”, a spus el. „Dezbatem doar dacă sunt de 10 ori sau de 100 de ori peste limită și cât de mult variază de la un lot la altul”

Riscurile potențiale ale contaminării cu ADN

König și Kirchner au citat preocupări legate de faptul că niveluri mai mari decât cele așteptate de contaminare cu ADN ar putea fi preluate în celulele umane în timpul vaccinării, cu consecințe necunoscute dacă acel ADN se integrează în genom.

Ei au citat „riscul de mutageneză inserțională”, în care segmentele de ADN străine perturbă secvențele normale de gene atunci când sunt inserate în genom, putând duce la mutații și la boli asociate, cum ar fi cancerul.

Cercetători precum McKernan au determinat deja că ADN-ul din vaccinurile COVID-19 cu ARNm include gena care promovează cancerul, virusul simian 40 (SV40) și secvențe de ADN plasmidic E. coli rămase din procesul de producție a vaccinului.

Într-o prezentare făcută în februarie la conferința International Crisis Summit-5, McKernan a subliniat că cererea de brevet a Moderna pentru vaccinul său COVID-19 cu ARNm a recunoscut riscurile de mutageneză inserțională.

Aceeași cerere de brevet afirmă că contaminarea cu ADN poate provoca cancer:

„Șablonul de ADN utilizat în procesul de fabricare a ARNm trebuie eliminat pentru a asigura eficacitatea produselor terapeutice și siguranța, deoarece ADN-ul rezidual din produsele medicamentoase poate induce activarea răspunsului înnăscut și are potențialul de a fi oncogen la populațiile de pacienți.”

McKernan a afirmat în prezentarea sa de la Summitul internațional al crizelor că „Suntem mereu în cancer.” El a propus următoarea „ipoteză cu 3 lovituri” privind impactul negativ asupra sănătății al vaccinurilor cu ARNm:

1. Creșterea mutagenezei cu contaminarea cu plasmidă dsDNA [ADN dublu catenar].

2. Efectele N1-metil-pseudouridinei utilizate pentru a stabiliza ARN-ul, care provoacă limfocitopenie, neutropenie, boli legate de IgG4 etc.

3. Inhibarea „gardienilor genomului”, genele de suprimare a tumorilor P53 și BRCA1.

Reglementări privind contaminarea ADN „total nepotrivite pentru scop

McKernan a subliniat că actualele reglementări care reglementează limita admisibilă a contaminării cu ADN în vaccinuri sunt „complet nepotrivite pentru scop.”

„Publicul trebuie să știe că orientările privind contaminarea cu ADN au presupus un timp de înjumătățire de 5-10 minute a ADN-ului gol în sânge”, a spus el. „Odată ce acest ADN este protejat de nanoparticule lipidice, nu mai este gol și nu se degradează, ci, în schimb, transfectează celulele.”

Potrivit lui McKernan, fragmentele de ADN pe bază de mamifere fac parte dintr-un „vector de terapie genică extrem de replicativ conceput pentru a produce mai mult din el însuși” și, prin urmare, se poate autoamplifica la nesfârșit odată ce a fost transfectat.

„La ce bun o limită de 10 ng dacă Pharma poate strecura o moleculă de ADN amplificabilă prin această reglementare?”, a întrebat el.

Autoritățile de reglementare au stabilit toleranța de contaminare cu ADN de 10 ng/doză în 1998.

„10 ng este o considerație extracelulară”, a declarat Karl Jablonowski, doctor în științe, cercetător științific principal pentru Children’s Health Defense. „Dacă ar fi să întrebați cât de mult ADN străin ar trebui să fie permis în interiorul nucleului, răspunsul este zero”, a declarat el pentru The Defender.

Speicher a adăugat că autoritățile de reglementare ignoră fragmentele cu o lungime mai mică de 200 de perechi de baze, deoarece acestea nu ar fi probabil problematice dacă ADN-ul ar rămâne în afara celulelor noastre.

Pentru a avea o perspectivă, având în vedere că ADN-ul din întregul genom uman este în medie de 6,41 pc (picograme), Jablonowski a menționat că „10 ng de ADN reprezintă întregul nostru genom de 1.560 de ori.”

‘Cât de nesăbuiți pot fi cu genomul uman?”

În ciuda posibilelor limitări, autoritățile europene de reglementare au aprobat metoda qPCR pentru a verifica dacă Comirnaty respectă limitele de contaminare cu ADN necesare de 10 ng/doză.

Potrivit lui König și Kirchner, în afară de testele qPCR ale producătorului asupra ingredientului activ, „nu se efectuează nicio altă cuantificare experimentală a ADN-ului pentru vaccin.”

Autoritățile de reglementare susțin că testarea produsului final nu este fezabilă, invocând potențiala interferență a nanoparticulelor lipidice care încapsulează ARNm.

Cu toate acestea, cercetătorii au subliniat că producătorii pot cuantifica cu precizie ARNm în aceleași nanoparticule. Aceștia au criticat autoritățile de reglementare pentru că s-au bazat pe datele qPCR limitate ale producătorilor și nu au impus cuantificarea directă a ADN-ului total în produsul final Comirnaty.

După ce alți oameni de știință au reprodus lucrările lui McKernan, agențiile de reglementare precum FDA, EMA și Health Canada au fost obligate să recunoască prezența SV40 în vaccinurile Pfizer.

Cu toate acestea, potrivit lui McKernan, aceste agenții au susținut că fragmentele de ADN sunt prea mici ca lungime și cantitate pentru a fi funcționale și nu au luat nicio măsură pentru a reglementa în continuare sau a retrage vaccinurile de pe piață.

De asemenea, McKernan a subliniat că, înainte de Legea națională din 1986 privind leziunile provocate de vaccinurile pentru copii (NCVIA), limita de contaminare cu ADN era de 1.000 de ori mai mică decât limita actuală de 10 ng.

Această relaxare a reglementărilor, împreună cu scutul de răspundere al NCVIA și progresele tehnologice, a făcut ca tehnologia de secvențiere a ADN-ului să fie „de 100.000 de ori mai ieftină”, a spus el, permițând companiilor producătoare de vaccinuri să adauge „reactivi de transfecție [cum ar fi LNP] pentru a se asigura că acest ADN intră în celule, se poate autoamplifica și se poate juca cu circuitele celulare.”

McKernan a spus:

„De ce nu secvențiază FDA aceste vaccinuri? Ce scuză au pentru a nu cunoaște secvența și frecvența exactă a fiecărei molecule de ADN și ARN dintr-un vaccin pe care intenționează să îl injecteze în miliarde de oameni? Cât de nepăsători pot fi cu genomul uman?”

În ciuda aparentei inactivități a agenției, o cerere recentă a unui cetățean canadian în baza Freedom of Information Act a dezvăluit „o activitate alarmantă în culise”, potrivit lui McKernan.

„Autoritățile de reglementare spun publicului să nu se îngrijoreze în legătură cu contaminarea, dar se agită pe plan intern pentru ca acest ADN să fie eliminat”, a spus el.

Suggest a correction